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蛋白酶K(39450-01-6)的功能及使用方法

2014-07-23 来源:亚科官网

      蛋白酶K,是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定,还具有降解天然蛋白质的能力,因而它应用很广泛,包括制备脉冲电泳的染色体DNA蛋白质印迹以及去除DNARNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性。

     推荐反应缓冲液50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2

   蛋白酶k配制标准:20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K):将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

   蛋白酶K的保存:保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,有效保证12月。

     孵育温度为5565℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。

     作用:蛋白酶K原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果。

 

     蛋白酶K的应用比较广泛,它可以消化包围靶DNA蛋白,因此使用蛋白酶K能够增加探针与靶核酸结合的机会增强杂交信号,但在使用蛋白酶K时要主要使用的浓度,过高或者过低都会破坏细胞的结构、核消失等影响试验结果。

 



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