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再谈盐酸胍、DTT等核酸检测试剂原料的作用

2020-03-18 来源:转载自第三方

近日,国内13省确诊病例归零的消息振奋人心。疫情态势向好是全国人民艰苦努力的结果,也离不开科技的支持。提到战疫科技不得不提到阻隔疫情扩散的重要手段——核酸检测。检测试剂原料是核酸检测发挥作用的关键。常用的核酸检测试剂原料有TRIS、盐酸胍、BSADTT等。这些试剂在核酸提取作用显著,盐酸胍、DTT等还可用于配制病毒灭活保存液,使用于样本提取阶段。

新冠病毒核酸检测的原理就是通过细胞裂解液,让病毒的RNA裸露出来,然后用实时荧光RT-PCR进行检测。因为新冠病毒的传染性非常强,为保护检测人员,降低其感染的风险,需要对病毒进行灭活处理。

病毒灭活是使病毒蛋白不再有生理活性,失去感染、致病和繁殖能力,主要方法是水浴高温灭活,即将样本置于水浴箱经半个小时56℃的高温灭活。另外,有些核酸检测试剂盒自带病毒灭活保存液,在样本采集阶段就能够“杀死”病毒并保护RNA

这种病毒保存液又称病毒采样液,以核酸提取裂解液为基础配制而成。主要成分为

平衡盐类、EDTA螯合剂、胍盐(如异硫氰酸胍、盐酸胍等)、阴离子表面活性剂(如十二烷基硫酸钠)、阳离子表面活性剂(如十四烷基三甲基草酸铵)、苯酚、8-羟基喹啉、二硫苏糖醇(DTT)、蛋白酶K[1]

因为是基于核算裂解液配制,所以盐酸胍、EDTADTT等试剂在这种病毒保存液中的作用同之前介绍的核酸提取中的作用相同[2]。盐酸胍不仅能够快速的破坏细胞膜,还能够变性蛋白质,使得蛋白质变性沉淀,从而让核酸能够摆脱蛋白质的缠绕。EDTA螯合剂能够与Mg2+Ca2+Mn2+Fe2+等金属离子结合,而减少金属离子对核酸质量的影响。DTT常作为二硫键还原剂,防止延缓酶的失活。

这种病毒保存液一方面直接裂解病毒释放核酸,消除核酸分解酶(RNase)以防止病毒的RNA降解。另外一方面,又能让病毒的蛋白变性,失去活性而“死掉”,不再有传染性,提高运输和检测阶段的安全性。

相关链接:盐酸胍EDTA螯合剂二硫苏糖醇(DTT)

参考资料:中华医学会检验分学会.新型冠状病毒(2019-nCOV)核酸实验室检测要点


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