二硫苏糖醇|CAS:3483-12-3|在提高CELI家族酶活性中的应用

CELI酶是一种单链、双链都特异识别的特异性核酸酶，目前CELI酶主要是从芹菜中提取，该酶可以特异性切割错配碱基,广泛应用于突变检测领域,传统理论认为该酶的催化活性只需要Mg²⁺和Zn²⁺。二硫苏糖醇，英文名DL-Dithiothreitol，简称DDT,分子式为C₄H₁₀O₂S₂，分子量为154.25，常用作还原剂，有抗氧化作用。今天小编来介绍DTT在制备CELI家族酶酶切缓冲液中的应用。

CELI家族酶酶切缓冲液由DTT、BSA（牛血清蛋白）、0.02%Triton X-100、0.1M KCl和HEPES缓冲液组成

其中：

含有DTT的CELI家族酶酶切缓冲液由Mutation DetectionKit-S100试剂盒缓冲液和DTT组成，Mutation DetectionKit-S100试剂盒缓冲液是美国环球基因公司的产品，产品目录号为706025；

DTT在CELI家族酶酶切缓冲液中的浓度为0.01-0.5mM、0.5-10mM或0.01-6mM；

BSA浓度为2ug/ml；

HEPES缓冲液浓度为0.1M、pH值为7.5。

新的催化活性物质DTT可以进一步提高CELI酶活，特别是对低丰度突变的检测，与传统的酶切方法相比，本发明的方法更为灵敏，DTT的终浓度在0.01-10mM范围内都可以提高CELI酶和CELII酶的检测灵敏度。对低丰度未知突变体的检测，如某癌症基因都有很好的检测效果，特别是TILLING技术平台检测诱变群体时，有明显优势，不仅仅简化了PCR纯化步骤，同时相应地提高了检测分辨率。

参考文献

CN106191228A  DTT在提高CELI家族酶活性中的应用