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IPTG 使用说明

2012-08-03 来源:亚科官网
中文品名: 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG)
英文名称: Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside
用途:异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。IPTG 常用于需要诱导 β-半乳糖苷酶活性的克隆实验。它常与 X-Gal Bluo-Gal 结合使用,用于重组细菌菌落的蓝白筛选,这些菌落可以诱导 lac 操纵子在大肠杆菌中的表达。IPTG lacI 阻遏蛋白结合并改变其构象而发挥作用,防止 β-半乳糖苷酶编码基因 lacZ 的抑制。
使用方法:首先把IPTG配制成23.83 mg/ml100 mM)的水溶液,并进行过滤除菌后保存。然后在100 ml的琼脂培养基中,加入100 μl的上述溶液、200 μlX-Gal20 mg/ml二甲基甲酰胺DMF)溶液)和100 μlAmp100 mg/ml),制作成IPTGX-GalAmp平板培养基。当DNA片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZAmp基因载体),然后转化至lacZ缺失细胞中后,涂布上述的IPTGX–GalAmp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。
配制方法:在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃
优点:
1.能诱导酶的合成,但又不被分解的分子,称为安慰诱导物。由于乳糖虽可诱导酶的合成,但又随之分解,产生很多复杂的动力学问题,因此人们常用安慰诱导物来进行各种实验。
2.IPTG不被菌体代谢,为乳糖类似物,一旦进入细胞就会产生持续长久的诱导效果,所以IPTG的诱导效率高,往往只需要很少量(1mmol/L)即可达到理想诱导效果。由于IPTG不被代谢,在胞内专一诱导外源蛋白的表达。不受细胞代谢的影响,诱导效果持续稳定。乳糖有双效作用,既能做为诱导剂异乳糖的前体物质,又可以做碳源,在诱导过程中,很不稳定,IPTG因其优异的稳定性决定了它适合做实验研究用。
3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。
4.半乳糖苷键中用硫代替了氧,失去了水解活性,但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物与酶位点的亲和力相同,IPTG虽不为β–半乳糖苷酶所识别,但它是lac基因簇十分有效的诱导物。
注意事项:培养噬菌体时,Top agar中的添加量为:25 μl/3 ml(24 mg/ml)含有
                     IPTG   的培养基4℃避光保存,须在1~2 周内使用。
保存:2-8°C冷藏保存,配制好后保存于-20°C,室温可放置一个月。远离热源及氧化剂。


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