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MTT溶液的配制

2010-08-18 来源:亚科官网

通常MTT配成的终浓度为5mg/ml,须用PBS(磷酸缓冲液)或生理盐水做溶剂。市面上一般MTT的包装为100mg,250mg1g

1.    对于100mg这样的小包装,厂家都是将MTT放入小管中的,建议不要再用天平称量分装,而应该一次性将其全配制成溶液,如100mg20m1PBS来溶解。具体做法:预先在5 0ml离心管(没有的话,可用培养瓶替代)加入20m1 PBS,从中先吸取500-1000u1 PBS装入含MTT的小管中,吹打若十次后将其移入50ml离心管,然后再混匀。可以重复几次,以使小管中的MTT不残留于管内。将MTT完全混匀后,用0.22 um滤膜过滤以除去溶液里的细菌,分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20度。按细胞培养板每孔需加10u1计算,一般每96孔板约击1m1,所以分装时可考虑每管分装1 ml

2.   对于大包装,可按上述方法称取一部分溶解,也有人将粉剂分装在EP管里,用的时候现配,直接往培养板中加。

3.   配制MTT时用PBS溶解,也有人用生理盐水配,60度水浴助溶。PBS配方:NaCl 8gKCl 0.2gNa2HPO4 1.44gKH2PO4 0.24g,调PH 7.4,定容至1L

注意事项:

1):在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。

2):配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感。

3):MTT一般最好现用现配,过滤后4度避光保存两周内有效,或配制成Smg/ml保存在-20度长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。

4MTT有致癌性,用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套。

 



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