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化学发光免疫分析中常用化学发光剂介绍

2019-06-26 来源:亚科官网
 
化学发光免疫测定(CLIA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。吖啶酯是较为理想的发光底物,在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。它是目前发展和推广应用最快的免疫分析方法,也是目前最先进的标记免疫测定技术,灵敏度和精确度比酶免法、荧光法高几个数量级,可以完全替代放射免疫分析、彻底淘汰酶联免疫分析。主要具有灵敏度高、特异性强、试剂价格低廉、试剂稳定且有效期(6-18个月)、方法稳定快速、检测范围宽、操作简单自动化程度高等优点。
 
用作标记的化学发光剂应符合条件:
 
1、能参与化学发光反应。
 
2、与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。
 
3、偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。
 
4、应不改变或极少改变被标记物的理化特性,特别是免疫活性。
 
鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。 
 
化学发光免疫分析中所使用的标志物分类 
 
(一)直接化学发光剂 直接用化学发光剂标记抗原或抗体。
 
吖啶酯是目前常用的直接标记发光剂。
 
1、吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm的光,具有很高的发光效率,其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。吖啶酯类发光剂可直接用于标记半抗原和蛋白质等。用于标记抗体时,结合稳定,结合后并不减少光量子的产生,可获得高的比活性,有利于双位点化学发光免疫分析的建立。
 
 2、三联吡啶钌 三联吡啶钌是电化学发光剂,它和电子供体三丙胺(TPA)在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。  
 
(二)酶促反应发光剂 利用标记酶(辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)的催化作用,使发光剂(底物)发光。
 
辣根过氧化物酶催化的发光剂为鲁米诺及其衍生物;碱性磷酸酶催化的发光底物为AMPPD。
 
1、鲁米诺及其衍生物 鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物都有化学发光特性。鲁米诺是最早合成的发光物质。
 
2、AMPPD 是一种新的化学发光剂,其分子结构中有两个重要部分,一个是连接苯环和金刚烷的二氧四节环,它可以断裂并发射光子;另一个是磷酸基团,它维持着整个分子结构的稳定。
 
    相关链接:吖啶酯
                         鲁米诺
                         AMPPD
 


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