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蛋白酶K的生产途径有哪些?使用蛋白酶K需注意哪些事项?

2020-06-17 来源:亚科官网

蛋白酶 kCAS号为39450-01-6,是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶。蛋白酶 K可降解天然蛋白质,不但广泛用于分子生物学和细胞生物学等领域的相关实验,而且在 食品、农业、医药等领域的应用也与日俱增。

蛋白酶 K的生产途径:

目前,蛋白酶 K主要通过两种途径制得,一种是直接从真菌中直接提取,另外一种是通过基因重组后表达。

真菌发酵纯化法:蛋白酶K来源于林伯氏白色念球菌,从真菌中提取的方法就是以林伯氏白色念球菌为出发菌株,然后经60Goγ射线诱变及原生质体紫外诱变,采用特定的培养基,经液态深层发酵生产蛋白酶 K。

基因改造法:通过合成与扩增获得蛋白酶K基因,然后通过克隆,转化,将蛋白酶K基因整合到酵母染色体上,通过酵母的筛选,选出能够高效表达目标蛋白的优质菌株,利用高密度发酵技术,进行高密度发酵表达蛋白酶K,然后经过蛋白质的分离纯化,获得高纯度高活性蛋白酶 K。

使用蛋白酶 K的注意事项:

1. 蛋白酶 K稳定性强,在变性剂尿素、SDS等溶剂中能够保有较高活性,但它是一种丝氨酸蛋白酶,广谱的丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟PMSF)能特异性结合到丝氨酸蛋白酶的活性丝氨酸残基,抑制蛋白酶 K活性

2. 蛋白酶 K本身是一种蛋白质,虽然具有高活性和高稳定性,但也会受到温度、pH值、保存环境和时间的影响,因此,为保证蛋白酶K活性,需蛋白酶K冻干的干粉在0~4℃保存,或溶液状态下于-20℃保存。蛋白酶 K溶液为无色透明,如果出现沉淀不能再使用。

相关链接:蛋白酶 K苯甲基磺酰氟PMSF)