蛋白酶K的生产途径有哪些？使用蛋白酶K需注意哪些事项？

蛋白酶 k，CAS号为39450-01-6，是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶。蛋白酶 K可降解天然蛋白质，不但广泛用于分子生物学和细胞生物学等领域的相关实验，而且在 食品、农业、医药等领域的应用也与日俱增。

蛋白酶 K的生产途径：

目前，蛋白酶 K主要通过两种途径制得，一种是直接从真菌中直接提取，另外一种是通过基因重组后表达。

真菌发酵纯化法：蛋白酶K来源于林伯氏白色念球菌,从真菌中提取的方法就是以林伯氏白色念球菌为出发菌株，然后经60Goγ射线诱变及原生质体紫外诱变，采用特定的培养基，经液态深层发酵生产蛋白酶 K。

基因改造法：通过合成与扩增获得蛋白酶K基因，然后通过克隆，转化，将蛋白酶K基因整合到酵母染色体上，通过酵母的筛选，选出能够高效表达目标蛋白的优质菌株，利用高密度发酵技术，进行高密度发酵表达蛋白酶K，然后经过蛋白质的分离纯化，获得高纯度高活性蛋白酶 K。

使用蛋白酶 K的注意事项：

1. 蛋白酶 K稳定性强，在变性剂尿素、SDS等溶剂中能够保有较高活性，但它是一种丝氨酸蛋白酶，广谱的丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟（PMSF）能特异性结合到丝氨酸蛋白酶的活性丝氨酸残基，抑制蛋白酶 K活性；

2. 蛋白酶 K本身是一种蛋白质，虽然具有高活性和高稳定性，但也会受到温度、pH值、保存环境和时间的影响，因此，为保证蛋白酶K活性，需将蛋白酶K冻干的干粉在0～4℃保存，或溶液状态下于-20℃保存。蛋白酶 K溶液为无色透明，如果出现沉淀则不能再使用。

相关链接：蛋白酶 K、苯甲基磺酰氟（PMSF）