肝功能检查常用到哪些体外诊断试剂原料？

肝功能检查是诊断肝胆系统疾病的重要辅助手段，肝功检查基本项目通常包括：谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、血清腺苷脱氨酶、γ-谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶等检查。本文总结了这些肝功能检测项目中常用的体外诊断试剂原料及其原理。

谷丙转氨酶（ALT）：谷丙转氨酶升高已普遍被认为是临床诊断肝炎活动性最灵敏的指标之一，血清谷丙转氨酶活性的检测是目前肝脏疾病诊断和健康体检应用最多的测定项目。

丙酮酸氧化酶法是检测谷丙转氨酶活性的主要方法，其原理是：ALT催化L-丙氨酸和α-酮戊二酸反应生成丙酮酸，丙酮酸在丙酮酸氧化酶的催化下氧化反应生成过氧化氢，过氧化氢与显色剂和4-氨基安替比林在过氧化物酶的催化下反应生成红色的化合物，根据生成的红色化合物线性反应吸光度的变化计算ALT的酶活浓度。其中显色剂为3,3',5,5'-四甲基联苯胺或苯酚等。

谷草转氨酶（AST）：谷草转氨酶（AST）又称天门冬氨酸氨基转移酶，对人体内谷草转氨酶浓度进行定量检测，有助于了解人体肝功能损害程度以及判断治疗效果，是常规肝功能检测项目。

化学发光测定法是近年来比较常用的谷草转氨酶测定方法，其原理是：用天门冬氨酸氨基转移酶催化L-天门冬氨酸和α-酮戊二酸生成L-谷氨酸；L-谷氨酸在L-谷氨酸氧化酶催化下产生过氧化氢；过氧化氢在过氧化物酶作用下，使化学发光物氧化而发光；光信号的大小与天门冬氨酸氨基转移酶的浓度呈正相关，其中化学发光物为鲁米诺。

总胆红素：总胆红素是人体内由血红素代谢产生的结合和非结合型胆红素的总称，主要用来诊断是否有肝脏疾病或胆道是否发生异常，血清胆红素测定是肝、胆功能检查中的一项重要检测项目。

总胆红素测定方法有重氮法、酶测定法和化学氧化法，检测试剂中一般用到对氨基苯磺酸、乙二胺四乙酸二钠、曲拉通X-100 、十二烷基硫酸钠等。

血清腺苷脱氨酶(ADA)：血清中的ADA主要来自肝脏，是反映肝损伤的敏感指标，可作为肝功能常规检查项目之一，依据该酶活性增高或降低反映肝细胞损伤和恢复程度。

体外诊断试剂原料3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸（HTBA）可用于血清腺苷脱氨酶(ADA)的检测，其原理如下：ADA催化底物腺苷脱氨生成次黄嘌呤核苷，次黄嘌呤核苷再经 PNP（嘌呤核苷磷酸化酶）作用生成次黄嘌呤。次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶作用下，生成尿酸和过氧化氢。而过氧化氢在过氧化物酶存在的情况下，可与3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸（HTBA）和4-氨基氨替吡啉（4-AA）反应产生有色醒类化合物，有色醒类化合物的生成速率与ADA的活性相关。通过测定550nm波长处吸光度的上升速率，即有色醒类化合物生成速率来测定腺苷脱氨酶的活性。

γ-谷氨酰转肽酶：在临床上，γ-谷氨酰转肽酶是诊断肝胆疾病的重要指标，被广泛用途于肝病（病毒性肝炎、急性肝炎等）及其它脏器疾病的诊断和预后检测。

多用比色法进行检测γ-谷氨酰转肽酶，主要检测原理是：基质丁酰硫代胆碱被γ-谷氨酰转肽酶水解成硫代胆碱，进而同5,5‘-二硫代-2-硝基苯甲酸(DTNB)反应生成硫代硝基苯甲酸(TNB)，TNB在405nm处有强吸收，生成速率同γ-谷氨酰转肽酶活性成正比。

碱性磷酸酶：碱性磷酸酶（ALP），作为重要的生物标志物和治疗靶点，其异常的高表达反映出机体的功能障碍和代谢异常，如：肝脏功能异常，骨质疏松和糖尿病等。

目前，多种技术手段被成功用于碱性磷酸酶的检测，包括：荧光、同位素标记、电化学、层析和表面增强拉曼散射等，常见的碱性磷酸酶底物有PNPP、BCIP/NBT组合。

肝功能常规检测相关试剂盒中，常包含缓冲液、稳定剂、表面活性剂、显色剂等组分，缓冲液有磷酸缓冲液，TRIS缓冲液，MES缓冲液等；稳定剂主要指牛血清白蛋白，酪蛋白；多糖类物质（蔗糖、海藻糖等）和聚乙二醇稳定剂；表面活性剂包括曲拉通X-100 、十二烷基硫酸钠等；显色剂包括TMB、PNPP、DTNB等。这些体外诊断试剂原料在疾病预防、诊断中发挥了至关重要的作用。