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Tris|77-86-1|在新型冠状病毒检测试剂盒中的应用

2022-02-11 来源:亚科官网

三羟甲基氨基甲烷(简称Tris,又名氨丁三醇)是一种重要的生物缓冲剂, 25℃下的pKa为8.06,pH缓冲范围:7.0-9.0,广泛应用于生物化学、分子生物学等领域中缓冲液的制备。CN111551743A 专利中,介绍了Tris在新型冠状病毒检测试剂盒中的应用。该试剂盒由6部分组成,具体为:发光底物液A、发光底物液B、样品稀释液、酶标工作液、校准品和磁珠悬浮液。接下来小编简述一下该试剂盒各组分的构成及制备方法。

1.发光底物液A

发光底物液A由Tris,盐酸和鲁米诺三部分组成;

制备方法:称取各组分,分别溶于蒸馏水中,定容,即得;其中Tris 0.01-0.05g/L,盐酸0.002-0.01ml/L,鲁米诺0.001-0.007g/L;

2.发光底物液B

发光底物液B由磷酸二氢钠,磷酸氢二钠,过氧化脲和氯化钠四部分组成;

制备方法:称取各组分,分别溶于蒸馏水中,定容,即得;其中磷酸二氢钠0.1-0.5g/L,磷酸氢二钠2.0-4.0g/L,过氧化脲0.002-0.05g/L,氯化钠3-15g/L。

3.样品稀释液

样品稀释液由BSA(牛血清白蛋白),氯化钠和ProCLin300三部分组成。

制备方法:称取各组分,分别溶于蒸馏水中,定容,即得;其中BSA 8-15g/L,氯化钠5-12g/L,ProCLin300 0.1-1ml/L;

4.酶标工作液

酶标工作液由辣根过氧化物酶标记的新型冠状病毒抗原(nCov-Ag-HRP),磷酸二氢钠,磷酸氢二钠,氨基比林,ProCLin300和CaSein(酪蛋白)六部分组成。

制备方法:称取各组分,分别溶于蒸馏水中,定容,即得。其中nCov-NAg-HRP 0.3-1.0mg/L,nCov-SAg-HRP 0.8-1.5mg/L,磷酸二氢钠0.05-0.4g/L,磷酸氢二钠2.0-4.0g/L,氨基比林0.2-1.5g/L,ProCLin300 0.1-1.0ml/L,CaSein(酪蛋白)1.0-4.0g/L;

5.校准品

本发明专利所用校准品为人源性血清。

6.磁珠悬浮液

磁珠悬浮液包括偶联有抗人IgM抗体的磁微粒。

制备方法:称取磁微粒,用碳二亚胺(EDC)活化,加入抗人IgM抗体,混悬,清洗,定容。偶联有抗人IgM抗体的磁微粒(以磁微粒的质量计)0.2-2g/L,其中,1g磁微粒上偶联有1-2g 的抗人IgM抗体;

使用以上方法制备的试剂盒有以下有益效果:

①该试剂盒将新型冠状病毒的N蛋白和S蛋白片段共同作为抗原,二者联合使用提高了试剂盒的检出率、灵敏度和特异性。

②该试剂盒对磁微粒上偶联的抗人IgM抗体的种类进行了特定选择,结果发现鼠抗人IgM抗体用于本发明具有相对更好的效果,阳性检出率更高。


参考文献

CN111551743A,北京贝尔生物工程股份有限公司.



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